久久久久99精品AV免费观看,国产精品96久久久久久AV不卡,亚洲国产一区二区三区在线观看,精品人妻无码AV一区二区

當前位置:主頁 > 技術文章 > Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量

Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量

更新時間:2016-07-15 點擊次數:8501

Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量

 

一、實驗原理

  蛋白質含有兩個以上的肽鍵(—CO—NH),因此有雙縮脲反應,在堿性溶液中,能與CU2+  形成絡合物。Folin-酚試劑反應是在雙縮脲反應的基礎上,引進Folin試劑(磷鉬酸-鎢酸試劑),蛋白質-銅絡合物能還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑,生成藍色物質。在一定條件下,藍色強度與蛋白質的量成正比例。

   本法的優(yōu)點是操作簡便、靈敏度高、較此外吸收法靈敏10~20倍,較雙縮脲法靈敏100倍,反應約在15min內有zui大顯色,并至少可穩(wěn)定幾小時。其不足之處是此反應受多種因素干擾。對雙縮脲反應發(fā)生干擾的基團,Tris.HCL緩沖劑以及蔗糖、硫酸銨、巰基化合物,酚類及檸檬酸,均對此反應有干擾作用。在測試時應排隊干擾因素或做空白實驗消除。含硫酸銨的溶液只需加濃Na2CO3-NaOH溶液即可顯色測定。若樣品酸度較高,顯色后色淺,則必須將Na2CO3-NaOH溶液的濃度提高1~2倍。

   本法可測定范圍是25~250µg蛋白質。          

二、實驗用品

(一)器材

 (1)722型分光光度計。

     (2)恒溫水浴鍋。

     (3)試管及試管架。

     (4)0.5ml,1ml及5ml移液管

  • 試劑

   (1)試劑甲。

   (A)4%Na2CO3溶液;

   (B)0.2mol/LNaOH溶液;

   (C)2%酒石酸鉀鈉溶液(或酒石酸鉀、酒石酸鈉);

   (D)1% CuSO4.5H2O溶液

     臨用前將(A):(B):(C):(D)=50:50:1:1(體積比)混合,此混合液即為試劑甲?;旌虾蟮娜芤?d內有效。

(2) Folin-酚試劑(試劑乙):在1.5L容積的磨口回流瓶中加入100g鎢酸鈉(Na2WO4.2H2O),25g鉬酸鈉((Na2MoO4.2H2O),及700ml蒸餾水,50ml 85%磷酸,100ml濃鹽酸充分混合,燒瓶內加小玻璃珠數顆,以防溶液溢出,接上回流冷凝管以文火回流10h?;亓鹘Y束后,加入150g硫酸鋰(LiSO4),50m重蒸水及數滴液溴,開口繼續(xù)沸騰15min,以除去多余的溴。冷卻后溶液呈金黃色(如果仍呈綠色,須再重復滴加溴水的步驟),定容至1L,過濾,濾液置棕色瓶中保存,可在冰箱長期保存。若此貯存液使用過久,顏色由黃變綠,可加幾滴液溴,煮沸數分鐘,恢復原色仍可繼續(xù)使用。使用時用標準NaOH滴定酸度,以酚酞為指示劑。該試劑的酸度應為2mol/L左右,將之稀釋至相當于1mol/L酸度使用,即為Folin-酚試劑。

(3)標準蛋白質溶液:可用結晶牛血清蛋白,預先經微量凱氏定氮法測定蛋白質含量,再根據其純度配制成500µg蛋白/ml溶液。

(三)材料

     血清使用前稀釋100倍或約含20~250µg蛋白/ml溶液。

 

三、實驗程序

    一、操作方法

 1.蛋白濃度標準曲線制作 

   取14支試管,分兩組按表9-1平行操作。

繪制標準曲線:以OD650值為縱坐標,標準蛋白量為橫坐標,在坐標紙上繪制標準曲線。

 

2.樣品溶液蛋白質濃度測定

  取6支試管,分兩組,按表9-2平行操作。

3、計算

掃一掃,加微信

版權所有 © 2025北京來亨科學儀器有限公司
備案號:京ICP備2024080360號-1 技術支持:化工儀器網 管理登陸 sitemap.xml

国产伦孑沙发午休精品| 国产精品久久久久久久妇| 最近2019中文字幕电影免费看| 姐姐的朋友5免费观看| 少女动漫在线高清免费观看 | 国内精品人妻无码久久久影院蜜桃| 国产精品18久久久久久| 欧美最猛性XXXXX69交| 亚洲AV无码码潮喷在线观看| 国产一区二区在线视频| 精国产品一区二区三区A片| 国产自拍AV| 国产精品自在线拍国产| 欧美av色香蕉一区二区蜜桃小说| 亚洲av久久无码精品九九| 国产中老年妇女精品| 最近中文字幕在线看免费完整版| 久久产精品一区二区三区 | 日韩精品视频一区二区三区| 亚洲爆乳巨臀无码专区| 免费a级毛片出奶水| 亚洲AV无码一区二区一二区潮浪| 麻豆AV无码精品一区二区| 漂亮人妻被修理工侵犯| 色狠狠色噜噜AV天堂一区| 欧美老妇激情xxxxxx按摩| 亚洲一区二区女搞男| 国产AV一区二区精品凹凸| 麻豆精品无码国产在线果冻 | 先锋影音人妻啪啪VA资源网站| 亚洲乱码av中文一区二区| 极品教师在线观看免费完整版| 精品国产丝袜黑色高跟鞋| 久久精品无码人妻无码AV蜜臀| 亚洲av日韩av永久无码下载| 国产情侣一区二区| 久久久国产精品人人片| 国产亚洲精品久久久闺蜜| 久久久久久久久久久精品| 国产精品亚洲日韩AV在线 | 午夜不卡久久精品无码免费|